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服務體系

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一、PCR污染的四種來源


1、標本或模板之間的交叉污染

   A、容器被污染;

   B、模板放置時,由于密封不嚴溢于容器外;

   C、容器外粘有模板而造成相互間交叉污染;

   D、模板吸取過程中,因氣溶膠或者其他原因引起移液器污染,從而導致交叉污染。


2、PCR試劑污染

   PCR試劑配置過程中,移液器、容器、水等原因造成試劑被PCR核酸模板污染。


3、PCR擴增產物污染(最常見)

   APCR產物拷貝量大,極微量的PCR產物污染,就可形成假陽性;

   BPCR產物氣溶膠污染(最常見)


4、實驗室中克隆質粒污染

 克隆質粒濃度高(剛提取完的質粒濃度可達到1011)另外在純化過程中需要用較多的實驗耗材和儀器,污染的可能性也很大;


二、實驗室污染的防治

1、每次實驗需設置陰性質控品;

2、實驗室需嚴格進行分區保證每區儀器設備專區專用不得出現混用情況;

3、實驗室人員及物品嚴格按照從試劑準備區到標本制備區到基因擴增區單向流動進行,不得逆向;

4、實驗操作結束后應立即進行實驗臺面的清潔;;

5、加樣時需嚴格按照防污染加樣進行,避免加樣過程中造成的交叉污染。


三、實驗室污染的處理辦法

如實驗室發生污染情況要去除污染,首先最重要的是保持連續通風,保證擴增產物片段能順利擴散出去。其次可采用稀酸處理法,對實驗室器材具用1mol/L鹽酸擦拭或浸泡,使殘余DNA脫嘌呤;再次采用紫外照射法,紫外波長(nm)一般選擇254/300nm,照射高度不易超過90cm,需要注意的是,選擇UV作為消除殘留PCR產物污染時,要考慮PCR產物的長度與產物序列中堿基的分布,UV照射僅對500bp以上長片段有效,對短片段效果不大;實驗室臺面、超凈工作臺應用10%次氯酸鈉(84)溶液擦拭清潔。如果污染長時間不能消除,建議更換另外廠家的PCR試劑進行檢測,因為每個廠家的引物設計區域不一樣;一般情況下,一家試劑公司的擴增產物不會在另外一家廠家的引物設計區域內,因此不會造成產物污染的假陽性。

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